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    細胞培養具體步驟

    來源: 上海撫生實業有限公司 >> 進入該公司展臺 2021/10/07 10:59:59 已瀏覽:
    導讀:細胞培養具體步驟


    一、復蘇
    1.把凍存管從液氮中取出來,立即投入37℃水浴鍋中,輕微搖動(注意防止蓋子不緊致使液體進入凍存管)。液體都融化后(大概1-1.5分鐘),拿出來噴點酒精放到凈工作臺里。

    2.把上述細胞懸液吸到裝10ml培養基的15ml的離心管中(用培養基把凍存管洗一遍,把粘在壁上的細胞都洗下來),1000轉離心5分鐘。

    3.把上清液倒掉,加1ml培養基把細胞懸浮起來。吸到裝有10ml培養基的10cm培養皿中前后左右輕輕搖動,使培養皿中的細胞均勻分布。

    4.標好細胞種類和日期、培養人名字等,放到37℃的5%CO2培養箱中培養,細胞貼壁后換培養基。

    5.根據細胞增長速度2-3天換一次培養基。

    二、傳代
    1.培養皿中的細胞覆蓋率達到80%-90%時要傳代。

    2.把原有培養基吸掉。

    3.加適當的胰蛋白酶(能覆蓋細胞就行),消化1-2分鐘。

    4.細胞都變圓后加入等體積的含血清的培養基終止消化。

    5.用移液槍吹打細胞,讓細胞懸浮起來。

    6.把細胞吸到10ml或15ml的離心管中,1000轉離心5分鐘。

    7.倒掉上清液,加1-2ml培養基,把細胞都吹起來。

    8.根據細胞種類把細胞傳到幾個培養皿中。一般,癌細胞分5個,正常細胞傳3個。繼續培養。

    三、凍存
    把細胞消化下來并離心(同上)。用配好的凍存液把細胞懸浮起來,分裝到滅菌的凍存管中,靜止幾分鐘,寫明細胞種類,凍存日期。4℃30min,-20℃30min,-80℃*,然后放到液氮灌中保存。
    凍存液的配制:70%的完全培養基+20%FBS+10%DMSO.DMSO要慢慢滴加,邊滴邊搖。

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